レーザーマイクロダイセクションを使用してバイオマーカーのワークフローを改善する方法
バイオマーカーは、癌などの特定の疾患の指標マーカーとして使用できます。 このように、腫瘍の微小環境は人々の警戒を容易に喚起することができます。 ただし、腫瘍領域と非腫瘍領域の間、および腫瘍自体の間には明らかな分子の違いがあります。 これらの状況は、これらの領域の特定の小さな部分を分離することによってのみ解読できます。
したがって、ライカLMDシステムでは、サンプルをPCTマイクロチューブなどの下流の分析容器に直接収集して、組織の迅速な均質化、タンパク質抽出、酵素加水分解を行うことができます。
圧力サイクリング技術（PCT、PressureBioSciences Inc.）は、高圧を使用して、大規模分析のためのサンプル準備をスピードアップします。 PCTはLMDサンプルの処理を1時間以内に完了でき、より大きな生検組織ブロックは3時間以内に処理できます。
この組み合わされた技術は、腫瘍の微小環境を高精度かつ高速に分離することができます。下流の分子は混合物としてではなく個別に分析できるため、異なる組織領域からの下流の分子の分析は非常に重要です。
レーザーマイクロダイセクションでは、レーザーを使用して顕微鏡下で細胞レベルでサンプルを切断します。切断後、ライカLMDシステムは重力を使用して、解剖学的構造を標本の下の容器に収集します。
単一細胞精度のバイオマーカー発見ワークフロー
ライカレーザーマイクロダイセクションシステムは、関心のある個々の細胞を正確に切断して、ワークフローを改善することができます。したがって、作業は視覚的に管理されており、周囲の組織を汚染することはありません。
1.サンプル準備
レーザーマイクロダイセクションは通常、特殊な薄膜スライスを使用します。 LMDのサンプル準備は比較的直感的であり、組織学の古典的な準備方法から取得できます。下流のプロテオミクスに関しては、完全なフィルムフリーアブレーションのために、PETフィルムスライス（ほとんど柔軟剤なし）またはDIRECTOR™スライスの使用をお勧めします。パラフィン包埋により、組織サンプルが組織を形成し、薄いスライスに切断できます。あるいは、凍結切片を使用してサンプル切片を準備することもできます。お客様の用途に最適なLMDスライスをご提供します。
2.固定と染色
LMDアプリケーションでは、目的の構造に応じて組織を固定および染色できます。これには、明視野および蛍光染色が含まれます。このステップは、染色装置によって自動化できます。ほとんどの汚れは、一般的に下流のプロテオミクスと互換性があります。それでもなお、早期の調査を行う必要があります。
3.視覚化とROI
ライカLMDシステムは、サンプルのフルスライド画像の概要を自動的に生成し、関心領域（ROI）に簡単に移動できます。 ADMソフトウェアモジュールは、関心のある領域を認識して自動的に形状をマークするか、手動で形状の輪郭を描くことができます。・ライカLMDシステムに関する詳細情報・レーザーマイクロダイセクションに関する記事とチュートリアル
マウスの脳、クレゾールパープル。 ADMソフトウェアモジュールを実行する前後に、ニューロンが自動的に識別および検出されます。
4.レーザーマイクロダイセクション
次に、特定のROIが視覚的に制御されたレーザーによって切り出され、重力によって直接収集されます。がん物質またはその他のROIは、マウスをクリックするだけで分離し、必要に応じて収集してから、必要に応じて1つ以上の異なる反応容器に収集できます。 PCR試験管などの標準的な消耗品を使用するか、特定のLMD収集デバイスを使用して、PCTμTubes試験管（Pressure BioSciences Inc.）などの下流の分析容器にサンプルを直接収集できます。詳細については、次の手順を参照してください。
5.タンパク質の準備
少量のサンプルの均質化、抽出、および酵素分解は、たとえば、Pressure BioSciencesInc。のPressureCycling Technology（PCT）を使用して行うことができます。 LMD-PCTワークフローに従うと、バイオペプチドを迅速かつ再現性よく調製でき、プロセス全体が1時間を超えないため、数時間を節約でき、小さな組織サンプルの調製は完全にハンズフリーです。
6.分析
サンプルは質量分析によって分析され、バイオマーカーが特定されます。
代表的な研究分野
・バイオマーカーの探索
・ 癌研究
・個別化医療
・トランスレーショナルリサーチ
・プロテオミクス
・メタボロミクス